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讓專業人員告訴你在實驗室里操作博日PCR儀時一定要注意的事情

更新時間:2021-05-11   點擊次數:696次

    實驗室操作博日PCR儀注意事項:

    盡管(guan)擴增序列的殘留污染(ran)大(da)部分是假陽(yang)性反(fan)(fan)應(ying)(ying)的原(yuan)因(yin)(yin),樣品間的交(jiao)叉污染(ran)也是原(yuan)因(yin)(yin)之(zhi)一。因(yin)(yin)此,不(bu)僅要在進行擴增反(fan)(fan)應(ying)(ying)是謹慎認(ren)真,在樣品的收集、抽提和擴增的所(suo)有環節都應(ying)(ying)該注意:

 ;   1.戴一次性手套,若(ruo)不小心濺上(shang)反應(ying)液,立即更換(huan)手套;

    2.使用(yong)一次性(xing)吸頭(tou)(tou),嚴禁與PCR產物分(fen)析室的吸頭(tou)(tou)混用(yong),吸頭(tou)(tou)不(bu)要(yao)長時間暴(bao)露于空氣中,避免氣溶膠的污染;

    3.避(bi)免(mian)反(fan)應(ying)液(ye)(ye)飛濺(jian),打(da)開反(fan)應(ying)管(guan)時為(wei)避(bi)免(mian)此(ci)種情況(kuang),開蓋前稍(shao)離心(xin)(xin)收集液(ye)(ye)體于(yu)管(guan)底。若不(bu)小心(xin)(xin)濺(jian)到(dao)手(shou)套或桌(zhuo)面上,應(ying)立刻更換手(shou)套并用(yong)稀酸擦拭桌(zhuo)面;

    4.操(cao)作多份(fen)樣品時,制備(bei)反應混合液,先將dNTP、緩(huan)沖液、引(yin)物和酶混合好,然后分裝,這樣即可(ke)以減少操(cao)作,避免污染,又可(ke)以增加反應的精(jing)確度;

    5.最后(hou)加入反應(ying)模板,加入后(hou)蓋緊反應(ying)管;

    6.操作時設立(li)陰(yin)陽性對(dui)照和空白對(dui)照,即可(ke)驗證PCR反(fan)應的可(ke)靠性,又可(ke)以協助判斷(duan)擴增系統的可(ke)信性;

    7.盡可能用可替(ti)換或可高壓(ya)處理(li)的加(jia)樣器(qi),由于加(jia)樣器(qi)最容(rong)易受產(chan)物氣溶膠或標本DNA的污染(ran),最好使用可替(ti)換或高壓(ya)處理(li)的加(jia)樣器(qi)。

    如沒有這種特(te)殊的加(jia)樣(yang)(yang)器,至少(shao)PCR操(cao)作過程中加(jia)樣(yang)(yang)器應該(gai)專用(yong),不(bu)能交叉(cha)使(shi)用(yong),尤其是PCR產(chan)物分析所用(yong)加(jia)樣(yang)(yang)器不(bu)能拿到(dao)其它兩個區;

    8.重復實驗,驗證結(jie)果,慎下(xia)結(jie)論(lun)。
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